La lignée germinale des Oiseaux fait l’ objet, depuis une quinzaine d’ années, de travaux expérimentaux basés sur la technique des cultures in vitro. Ces recherches ont apporté des résultats décisifs concernant les questions du transport des cellules germinales primordiales (CGP) par la voie sanguine (technique des parabioses circulatoires in vitro, Wolff & Simon, 1957) et de la colonisation des ébauches gonadiques (technique des associations in vitro, Dubois, 1964, 1968).

Récemment, Fargeix (1967a, b) utilisant la technique de fissuration du blastoderme de Canard (Wolff & Lutz, 1947) et Dubois (1967n, b) ont démontré que les initiales germinales de la blastula sont précocement entraînées par les mouvements morphogénétiques caudo-céphaliques. La migration de l’ endophylle vers l’ avant les emporte et les distribue dans Faire extra-embryonnaire du croissant germinal antérieur. Les cellules germinales peuvent y être identifiées à partir de la 15e h de l’ incubation (Reynaud, 1967), avant leur entrée dans le mésoblaste.

Par contre, il n’ existe aucun travail expérimental sur le problème de l’ entrée des CGP dans le réseau vasculaire embryonnaire. Si de nombreux auteurs ont décrit l’ entrée active des CGP dans les îlots sanguins par amiboïdisme, leurs observations sont d’ ordre purement histologique et les causes de ‘l’ embarquement’ des gonocytes dans la circulation demeurent inconnues.

Nous savons (Dubois, 1967n, b) que les CGP situées primitivement dans l’ endophylle montrent une activité amiboïde précoce: dans les fragments de blastulas cultivés in vitro, les CGP quittent activement le feuillet profond et migrent vers les feuillets embryonnaires qu’ elles peuvent coloniser.

Une activité migratrice analogue existe-t-elle au niveau du croissant germinal antérieur, dans les conditions normales du développement? Le mésoblaste et les îlots sanguins exercent-ils une attraction sur les CG situées dans l’ endoblaste vitellin? Cette attraction est-elle spécifique?

Les expériences sont faites avec les œufs de la race Leghorn blanche, incubés pendant une quinzaine d’ heures (stade de la jeune ligne primitive). Le milieu de culture est celui de Wolff & Haffen (1952), enrichi par du sérum de Poulain.

Dans une première série expérimentale, nous sectionnons transversalement le germe selon son diamètre. Nous introduisons d’ un seul côté, entre le feuillet profond (endophylle endoblaste vitellin) et le feuillet superficiel (ectoméso-blaste) de la moitié antérieure, un fragment de membrane coquillière convenablement taillé (Schéma I, A). L’ ensemble est cultivé pendant 24 h. Dans une seconde série expérimentale, nous prélevons le croissant endophyllien antérieur fertile et nous l’ associons in vitro dans un repli de membrane vitelline (Wolff, 1960) à divers tissus ou organes pendant 24 h. Ces tissus ou organes proviennent d’ embryons âgés de 7 à 9 jours d’ incubation ; nous avons ainsi éprouvé les tissus sous-dermiques et dermiques de la peau de 7 et 9 jours, le mésonéphros, le foie, le poumon du 9e jour.

Après les techniques de fixation appropriées, les expiants sont coupés à 5 et colorés par l’ hématoxyline-éosine ou par le Noir Soudan (contre coloration: hémalun) selon les modalités histochimiques rapportées ailleurs (Dubois & Cuminge, 1968).

I. Interposition de la membrane coquillière

A. Description de l’ expérience (Schéma 1, A et B)

Le fragment de membrane coquillière est mis en place au stade de la jeune ligne primitive, après séparation mécanique des deux feuillets. A ce stade, l’ endophylle et les cellules germinales terminent leur migration en direction crâniale et le croissant germinal antérieur des Oiseaux se met en place.

La reconstitution d’ une coupe transversale après 24 h de culture (figure 1 B) permet de comparer les faits qui se produisent du côté témoin (côté droit de la figure IB, détails 1, 2, 3) et du côté où la membrane coquillière a été interposée (côté gauche de la figure 1 B, détails 4 et 5). Cette reconstitution montre les positions relatives des formations après la mise en place du feuillet mésoblastique et la différenciation de l’ axe neural.

Du côté témoin, le réseau vasculaire s’ édifie entre l’ épithélium ectoblastique et l’ endoblaste vitellin. Quelques éléments figurés du sang apparaissent dans la trame mésoblastique qui s’ organise.

Du côté de Vintervention, la membrane coquillière a isolé précocement le feuillet profond. Au cours de la gastrulation, le mésoblaste invaginé glisse au-dessus de l’ obstacle où il édifie, dans les meilleures conditions, un réseau vasculaire vide.

Schéma I. A. Principe de l’ expérience. Germe ayant atteint le stade de la jeune ligne primitive (LP) et coupé transversalement selon son diamètre. Interposition, d’ un seul côté, d’ un fragment de membrane coquillière (MC) entre le feuillet profond (endoblaste vitellin = EV) et le feuillet superficiel (ectomésoblaste = EctM). Du côté témoin (côté droit de la figure), les CGP situées dans le bourrelet endophyllien antérieur (BEA) pourront envahir librement le réseau vasculaire en voie d’ édification.

B. Reconstitution d’ une coupe selon X-Y, après 24h de culture. Du côté témoin (côté droit) les CGP quittent les formations profondes et entrent dans le réseau vasculaire. Du côté de l’ intervention, les CGP quittent l’ endoblaste vitellin et viennent se coller sous la membrane coquillière interposée. Au-dessus de celle-ci, la trame mésoblastique demeure stérile. Remarquer les positions relatives des différents éléments de la culture. Les détails 1-5 correspondent aux figures 1-5 de la planche 1 ( x environ par 5).

(Ect=ectoblaste; M = mésoblaste; EV =endophylle, endoblaste vitellin; V= vitellus; RK=rempart vitellin; C=cerveau; MC= membrane coquillière.)

Schéma I. A. Principe de l’ expérience. Germe ayant atteint le stade de la jeune ligne primitive (LP) et coupé transversalement selon son diamètre. Interposition, d’ un seul côté, d’ un fragment de membrane coquillière (MC) entre le feuillet profond (endoblaste vitellin = EV) et le feuillet superficiel (ectomésoblaste = EctM). Du côté témoin (côté droit de la figure), les CGP situées dans le bourrelet endophyllien antérieur (BEA) pourront envahir librement le réseau vasculaire en voie d’ édification.

B. Reconstitution d’ une coupe selon X-Y, après 24h de culture. Du côté témoin (côté droit) les CGP quittent les formations profondes et entrent dans le réseau vasculaire. Du côté de l’ intervention, les CGP quittent l’ endoblaste vitellin et viennent se coller sous la membrane coquillière interposée. Au-dessus de celle-ci, la trame mésoblastique demeure stérile. Remarquer les positions relatives des différents éléments de la culture. Les détails 1-5 correspondent aux figures 1-5 de la planche 1 ( x environ par 5).

(Ect=ectoblaste; M = mésoblaste; EV =endophylle, endoblaste vitellin; V= vitellus; RK=rempart vitellin; C=cerveau; MC= membrane coquillière.)

B. Comportement des cellules germinales primordiales (planche 1, fig. 1-5 correspondant aux détails de la figure 1 B)

Après 24 h de culture, les techniques histologiques classiques permettent de reconnaître sans ambiguïté les CGP qui se sont différenciées in vitro.

  1. Côté témoin. Quelques CGP sont identifiées dans l’ endoblaste vitellin extra-embryonnaire (planche 1, fig. 1). Mais la plupart envahissent le système vasculaire en formation. Elles sortent de l’ endoblaste vitellin et migrent vers la trame mésoblastique qu’ elles transgressent en plusieurs endroits. La traversée de l’ endothélium des îlots sanguins se fait par diapédèse comme nous le verrons plus loin. Les CGP flottent librement dans les lacunes préfigurant les îlots de Pander-Wolff (planche 1, fig. 2), ou adhèrent aux travées mésoblastiques (planche 1, fig. 3).

  2. Côté de la membrane coquillière. Les CGP quittent spontanément et activement les replis de l’ endophylle et viennent se coller sous la membrane coquillière interposée (planche 1, fig. 4-6). Il arrive que l’ on retrouve les CGP en place dans leur lieu d’ origine (planche 1, fig. 4), mais la plupart sont identifiées dans l’ espace limité par les replis de l’ endoblaste vitellin et la membrane coquillière (planche 1, fig. 5) ou contre l’ obstacle (planche 1, fig. 4-6). Au-dessus de la membrane coquillière, le système lacunaire mésoblastique est souvent pauvrement représenté. Quand il est présent, il demeure stérile dans la grande majorité des cas. Quelques rares CGP peuvent y être décelées: il s’ agit d’ éléments germinaux libérés de l’ endophylle très précocement, avant la mise en place de l’ obstacle, ou de gonocytes qui passent à l’ extrémité proximale de la membrane coquillière, ainsi que nous avons pu le constater dans quelques cas.

  3. Conclusions. Cette expérience confirme l’ hypothèse de l’ origine exclusivement endoblastique des initiales germinales, hypothèse qui a déjà reçu unedémonstration expérimentale (Dubois, 1967a, b) et qui ne s’ appuyait, jusqu’ alors, que sur des observations d’ ordre histologique.

Elle établit d’ autre part que la sortie des gonocytes hors de l’ endophylle n’ est pas déterminée par un contact direct entre le mésoblaste et les éléments germinaux. Les résultats des expériences qui réalisent l’ éloignement (et parfois l’ absence) de la trame mésoblastique montrent au contraire que la sortie des CGP hors de l’ endoblaste vitellin n’ est pas spécifiquement provoquée par le réseau vasculaire.

II. Associations entre Vendophylle et divers tissus ou organes, en culture in vitro

Nous avons cherché à savoir si des tissus autres que le réseau vasculaire pouvaient être envahis par les CGP situées dans l’ endoblaste vitellin. Il est facile de prélever exclusivement le feuillet profond antérieur d’ un germe ayant atteint le stade de la jeune ligne primitive. Le matériel endoblastique fertile ainsi isolé peut être cultivé, seul ou en association avec des tissus variés, dans un repli de membrane vitelline.

A. Association avec le réseau vasculaire postérieur

Nous avons vérifié au préalable que l’ entrée dans le réseau vasculaire est possible dans un système d’ association in vitro. Les îlots sanguins sont prélevés à la partie postérieure d’ un embryon de 12 somites. Us sont stériles puisque, à ce stade, les CGP sont localisées dans la partie antérieure du germe (Simon, 1957). Après 24 h de culture, nous retrouvons dans les coupes histologiques les différentes étapes de la colonisation du réseau vasculaire par les CGP provenant de l’ endophylle (planche 2, fig. 7-9). La traversée de l’ endothélium des capillaires se fait par diapédèse (planche 2, fig. 8). Le comportement des gonocytes est le même que dans les conditions normales.

B. Associations hétérogènes

  1. Remarques préliminaires. La proximité des îlots sanguins est-elle nécessaire pour que la sortie des CGP s’ effectue? Il ne semble pas car dans les fragments d’ endophylle cultivés seuls, il arrive fréquemment que les CGP sortent spontanément et flottent librement dans des lacunes (planche 2, fig. 10). D’ autre part nous avons décelé, dans des embryons normaux des stades prolongement céphalique et premiers somites, des CGP installées dans l’ épithélium ecto-blastique antérieur (planche 2, fig. 13). Ces faits se produisent dans la zone antérieure envahie tardivement par le mésoblaste extra-embryonnaire (région du proamnios). La source primaire des CGP étant l’ endoblaste vitellin, de telles observations suggèrent qu’ en l’ absence de mésoblaste les gonocytes peuvent quitter leur lieu d’ origine et envahir d’ autres tissus que le réseau vasculaire.

  2. Propriétés migratrices des CGP du croissant endophyllien antérieur, dans les associations hétérogènes in vitro. Afin d’ éprouver les propriétés migratrices de ces gonocytes primordiaux, le bourrelet endophyllien antérieur est associé à du poumon, de la peau, du foie ou du mésonéphros prélevés sur des embryons de 7 à 9 jours d’ incubation. Dans tous les cas, les résultats sont positifs. Les CGP quittent activement le feuillet profond et pénètrent dans les espaces libres ou les capillaires du foie (planche 2, fig. 11, 12). L’ envahissement du mésonéphros est souvent considérable. La structure lacunaire de cet organe offre des conditions favorables à une invasion: les gonocytes s’ insinuent dans les espaces intertubulaires et adhèrent aux tubules mésonéphrétiques (planche 3, fig. 14). Nous n’ avons jamais décelé de CGP installée dans l’ épithélium des tubules.

    Les gonocytes primordiaux envahissent préférentiellement les capillaires ou les espaces libres. Mais ils peuvent tout aussi bien pénétrer dans le mésenchyme sous-dermique ou dermique de la peau de 9 jours (planche 3, fig. 15). De nombreux gonocytes colonisent ainsi le tissu étranger en y subissant souvent des déformations imposées par la structure du tissu envahi. Leur amiboïdisme les entraîne parfois très loin dans le mésenchyme étranger (planche 3, fig. 16); mais si les CGP rencontrent un espace libre, elles s’ y arrêtent comme le montre la figure 17 de la planche 3 qui représente un cas d’ association avec du poumon.

    Enfin, si l’ association avec la peau se fait du côté épidermique, les CGP quittent l’ endophylle et peuplent les lacunes ménagées par les deux tissus ou par les jeunes germes plumaires. Elles ne pénètrent pas dans l’ épithélium épidermique.

  3. Série témoin: associations hétérogènes avec de jeunes gonades morphologiquement indifférenciées. Nous savons, par les résultats d’ expériences antérieures (Dubois, 1964, 1965) qu’ un épithélium germinatif attractif provoque la sortie des gonocytes primaires hors de la gonade embryonnaire, comme celle des CGP hors du réseau vasculaire (Dubois, 1968).

    Dans les cas d’ association avec la peau (planche 3, fig. 18) et avec le poumon (planche 3, fig. 19, 20) des gonocytes primaires pourtant favorablement placés n’ ont pas pénétré dans les tissus étrangers. Les gonocytes primaires de la gonade morphologiquement indifférenciée (6e jour de l’ incubation) n’ envahissent donc pas les tissus hétérogènes que colonisent les CGP de l’ endophylle. Nous examinerons, avec l’ interprétation de nos résultats, les conséquences pratiques que ce fait implique.

III. Discussion. Conclusions générales

(A) Nos expériences confirment que les CGP ont leur origine exclusivement dans l’ endoblaste vitellin. Au stade de la jeune ligne primitive, la grande majorité du lot initial s’ y trouvent encore. Arrivées dans la zone du croissant extraembryonnaire antérieur, les CGP entrent activement dans le réseau vasculaire en cours d’ édification. Mais les gonocytes peuvent essaimer spontanément hors de l’ endophylle ainsi que le prouvent les résultats d’ expériences dans lesquelles l’ action des capillaires sanguins est contrariée (interposition d’ un obstacle) ou supprimée (cultures in vitro}.

Enfin, les CGP de l’ endophylle peuvent quitter leur lieu d’ origine et envahir des tissus aussi variés que la peau, le poumon, le foie, le mésonéphros d’ embryons de 7 à 9 jours d’ incubation.

L’ ensemble de ces résultats conduit à admettre que l’ entrée des CGP du Poulet dans le réseau vasculaire n’ est pas déterminée par un mécanisme attractif spécifique.

B. Interprétation des résultats

Il n’ est pas impossible que l’ endophylle exerce un effet répulsif sur les CGP. Outre que cet effet est difficile à démontrer, il n’ explique pas pourquoi les CGP envahissent les tissus environnants. L’ hypothèse de l’ attraction non-spécifique des divers tissus rend mieux compte de leur colonisation par les gonocytes, encore qu’ elle soit inutile pour expliquer les sorties spontanées …

L’ explication la plus satisfaisante nous semble être la suivante. Dans les conditions normales du développement, les CGP quittent activement l’ endophylle (pour des raisons encore inconnues) et envahissent le mésoblaste récemment invaginé, ébauche du système vasculaire, parce que c’ est le tissu le plus proche. Elles y pénètrent essentiellement pour des raisons de proximité. Elles pénétreraient indifféremment dans d’ autres tissus si elles en avaient la possibilité, ainsi que le démontrent les associations hétérogènes. Cela se produit parfois dans la morphogenèse normale et l’ on voit des CGP pénétrer dans des formations embryonnaires autres que le mésoblaste.

Cet exode des CGP du Poulet hors de l’ endophylle n’ est pas sans rappeler la migration des gonocytes primordiaux des Batraciens Anoures vers les organes dorsaux (Gipouloux, 1964a, b, 1967).

Mais à ces stades précoces du développement, l’ activité amiboïde des CGP est déterminée par un mécanisme différent de celui qui commandera leur entrée dans les ébauches gonadiques. Tout se passe comme si, au début de l’ ontogenèse, leur irritabilité était plus grande : excitées par des stimulus émis de tissus différents, elles essaiment et s’ installent dans les formations les plus diverses et les plus insolites comme la peau ou le poumon. Elles envahissent au hasard des tissus où elles trouvent probablement de meilleures conditions de nutrition ou d’ oxygénation que dans l’ endoblaste vitellin.

Plus tard, elles colonisent électivement les épithéliums germinatifs, à l’ exclusion de tout autre tissu, guidées par un chimiotactisme spécifique d’ une remarquable efficacité. Le fait que la peau, ou le poumon, n’ attire pas les gonocytes primaires de la gonade morphologiquement indifférenciée apporte une preuve supplémentaire et convaincante d’ une différence dans les mécanismes de migration. En effet, un jeune épithélium germinatif attractif provoque la sortie massive de ces gonocytes primaires hors de la gonade, comme il détermine celle des CGP en transit dans la circulation embryonnaire.

La conséquence de ceci est qu’ il sera nécessaire, dans les recherches futures sur la nature et le mode d’ action du facteur attractif, de s’ adresser aux gonocytes primaires et non aux CGP. Alors que ces dernières sont excitées par divers tissus (y compris les ébauches gonadiques), les gonocytes primaires donnent l’ assurance que leur réponse n’ est déterminée que par le stimulus émis par les épithéliums germinatifs attractifs.

Tableau 1.

Evolution de la lignée germinale des Oiseaux, depuis la fécondation de V ovule (A) jusqu’ à l’ installation des CGP dans les ébauches gonadiques (H)

Evolution de la lignée germinale des Oiseaux, depuis la fécondation de V ovule (A) jusqu’ à l’ installation des CGP dans les ébauches gonadiques (H)
Evolution de la lignée germinale des Oiseaux, depuis la fécondation de V ovule (A) jusqu’ à l’ installation des CGP dans les ébauches gonadiques (H)

C. Conclusions générates

Nous résumons dans un tableau récapitulatif l’ évolution de la lignée germinale des Oiseaux, depuis la fécondation de l’ ovule (A) jusqu’ à l’ installation des CGP dans les ébauches gonadiques (H). A la ponte, les initiales germinales se trouvent dans une bande transversale à prédominance postérieure nette (D). Après une quinzaine d’ heures d’ incubation, les CGP sont localisées dans le croissant germinal antérieur (E). Le stade transitoire décrit en D et le déplacement caudo-céphalique des CGP nous permettent, par extrapolation, de reporter l’ origine des initiales germinales des Oiseaux dans les blastomères — que l’ on peut considérer comme les plus végétatifs — du rempart vitellin postérieur (C). Ce stade est actuellement hypothétique; il est probablement contemporain des phénomènes qui déterminent l’ axe de symétrie de la morula, une dizaine d’ heures avant la ponte d’ après Vintemberger & Clavert (1959). Les CGP des Oiseaux auraient donc la même origine embryologique que celles des Poissons, des Batraciens Anoures, des Chéloniens, de certains Lacertiliens et des Mammifères. Leur localisation dans le croissant germinal antérieur est secondaire. Elle résulte de l’ effet de mouvements morphogènes prégastruléens qui entraînent les CGP en direction crâniale. Les cellules germinales subiraient passivement ces remaniements qui les emportent loin des territoires sexuels.

Au niveau du croissant germinal antérieur, les CGP essaiment hors de l’ endophylle et envahissent le réseau vasculaire en formation (F). Si elles subissent une attraction, analogue à celle que les organes mésodermiques dorsaux exercent sur les gonocytes des Anoures, cette attraction n’ est pas spécifique.

Après cet épisode d’ activité amiboïde, les CGP des Oiseaux subissent une nouvelle migration passive par la voie vasculaire (G). Nous savons aujourd’ hui que ce transport par la circulation est un processus adaptatif consécutif à l’ éloignement des gonocytes. Il est bien établi que c’ est la solution adoptée non seulement par les Oiseaux mais aussi par les embryons de certains Reptiles dont les CGP sont éloignées des ébauches sexuelles (Lacertiliens et Ophidiens, notamment la Vipère — Hubert, 1968).

Lorsqu’ elles passent à proximité des ébauches gonadiques, les CGP en transit dans la circulation retrouvent leur activité amiboïde et colonisent activement les épithéliums germinatifs selon les modalités d’ une migration interstitielle (H). Les Oiseaux sont actuellement le seul groupe où l’ on a pu démontrer expérimentalement que cette dernière phase de la migration est déterminée par un chimiotactisme spécifique d’ une grande efficacité. On peut raisonnablement généraliser ces résultats aux autres groupes de Vertébrés.

La localisation antérieure et la migration vasculaire des cellules germinales des Oiseaux ont longtemps consacré la situation originale de ce groupe parmi les autres Vertébrés. Mais les recherches récentes ont démontré que ces caractères originaux n’ ont, en réalité, qu’ une valeur secondaire et qu’ ils ne sauraient constituer les traits fondamentaux de la lignée germinale des Oiseaux. Le fait que la localisation ‘avienne’ se retrouve chez plusieurs Reptiles, et surtout chez la Vipère, est une confirmation de ce point de vue.

En reportant l’ origine des initiales germinales dans les blastomères les plus végétatifs et en démontrant le chimiotactisme spécifique qui préside à l’ installation des gonocytes dans les épithéliums germinatifs, ces recherches ont contribué à combler le fossé qui, sur ces points particuliers, séparait les Oiseaux des autres groupes, et permis d’ esquisser une théorie unitaire de la lignée germinale des Vertébrés.

  1. Les cellules germinales primordiales du Poulet (CGP) pénètrent activement dans le réseau vasculaire en formation. Il est possible d’ empêcher leur entrée dans les îlots sanguins en interposant (stade de la jeune ligne primitive) un obstacle constitué par une membrane coquillière. Mais cette intervention ne supprime pas la sortie des CGP hors de l’ endoblaste vitellin, leur lieu d’ origine. De plus, en l’ absence de vaisseaux (culture de fragments d’ endophylle isolés, in vitro) les CGP essaiment spontanément. La sortie des CGP n’ est donc pas provoquée spécifiquement par le réseau vasculaire.

  2. D’ autre part, des associations hétérogènes in vitro démontrent que les CGP situées dans l’ endoblaste vitellin peuvent essaimer et envahir des tissus ou organes aussi variés que le mésonéphros, la peau, le foie, le poumon d’ embryons âgés de 9 jours d’ incubation. Ces tissus ne sont pas colonisés par les gonocytes primaires de la gonade morphologiquement indifférenciée.

  3. Ces résultats conduisent à admettre que l’ entrée des CGP dans le réseau vasculaire n’ est pas déterminée par une attraction spécifique et que leur ami-boïdisme, aux stades précoces du développement, est provoqué par un mécanisme différent de celui qui commandera leur entrée dans les épithéliums germinatifs.

  4. Les conclusions générales donnent une vue d’ ensemble sur l’ évolution de la lignée germinale des Oiseaux, depuis la fécondation de l’ ovule jusqu’ à la colonisation des ébauches gonadiques.

The mechanism of entry of the primordial germ cells into the vascular network in chick embryo

  1. The primordial germ cells of the chick (PGC) penetrate actively into the vascular network during its formation. It is possible to block their entry into the vasoformative areas by interposing (at the early primitive streak stage) an obstacle in the form of a piece of shell membrane. The intervention does not prevent the PGC from leaving their place of origin, the vitellin endoblast. In addition, in the absence of blood vessels (culture of fragments of isolated endophyll in vitro) the PGC migrate spontaneously at random. Therefore the migration of the PGC is not specifically induced by the vascular system. On the other hand, heterogeneous associations in vitro show that the PGC situated in the vitellin endoblast can migrate and invade tissue or organs as varied as mesonephros, skin, liver and lung of 9-day embryos. These tissues are not colonized by the primary gonocytes of the morphologically undifferentiated gonad.

  2. These results lead us to suppose that the entry of the PGC into the vascular network is not caused by a specific attraction and that their amoeboid-like movements in the early stages of development are provoked by mechanisms which differ from those causing their entry into the germinal epithelium.

  3. An over-all view of the evolution of the avian germinal cell line from the fertilization of the ovule up to the colonization of the gonad primordia is presented.

Dubois
,
R.
(
1964
).
Sur l’ attraction des éléments germinaux de gonades indifférenciées par le jeune épithélium germinatif chez l’ embryon de Poulet, en culture in vitro
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
258
,
5070
2
.
Dubois
,
R.
(
1965
).
Sur l’ attraction exercée par le jeune épithélium germinatif sur les gonocytes primaires de l’ embryon de Poulet, en culture in vitro : démonstration à l’ aide de la thymidine tritiée
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
260
,
5885
7
.
Dubois
,
R.
(
1967a
).
Sur l’ origine et l’ amoeboïdisme des cellules germinales de l’ embryon de Poulet en culture in vitro et leur localisation dans le germe non incubé
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
265
,
497
500
.
Dubois
,
R.
(
1967b
).
Localisation et migration des cellules germinales du blastoderme non incubé de Poulet, d’ après les résultats de cultures in vitro
.
Archs Anat. microsc. Morph, exp
.
56
,
245
64
.
Dubois
,
R.
(
1968
).
La colonisation des ébauches gonadiques par les cellules germinales de l’ embryon de Poulet, en culture in vitro
.
J. Embryol. exp. Morph
.
20
,
189
213
.
Dubois
,
R.
&
Cuminge
,
D.
(
1967
).
Aspect ultrastructural des cellules germinales de l’ embryon de Poulet
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
264
,
2803
6
.
Dubois
,
R.
&
Cuminge
,
D.
(
1968
).
Sur l’ aspect ultrastructural et histochimique des cellules germinales de l’ embryon de Poulet
.
Ann. Hist
.
13
,
33
50
.
Fargeix
,
N.
(
1967a
).
Les cellules germinales chez de jeunes embryons de Canard développés à partir de moitiés antérieures et postérieures de blastoderme
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
264
,
2922
5
.
Fargeix
,
N.
&
Theilleux
,
D.
(
1967b
).
Les cellules germinales de jeunes embryons de Canard issus de moitiés antérieures et postérieures de blastoderme, isolées après 6 et 9 h d’ incubation
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
265
,
2019
22
.
Gipouloux
,
J. D.
(
1964A
).
Les somites attirent les gonocytes primordiaux situés dans l’ endoderme: démonstration expérimentale chez la Grenouille verte {Rana escalenta L
.).
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
258
,
1066
8
.
Gipouloux
,
J. D.
(
1964b
).
Une substance diffusible émanée des organes mésodermiques dorsaux attire les cellules germinales situées dans l’ endoderme : démonstration expérimentale chez le Crapaud commun (Bufo bufo L
.).
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
259
,
3844
7
.
Gipouloux
,
J. D.
(
1967
).
Recherches expérimentales sur l’ origine et la migration des cellules germinales et sur la morphogenèse de la glande génitale chez les Amphibiens Anoures
.
Thèse
,
210
pages.
Hubert
,
J.
(
1968
).
A propos de la lignée germinale chez deux Reptiles: Anguis fragilis L. et Vípera aspis L
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
266
,
231
3
.
Reynaud
,
G.
(
1967
).
Mise en évidence des cellules germinales dans les jeunes blastodermes d’ Oiseau par la technique de coloration P.A.S
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
265
,
1636
9
.
Simon
,
D.
(
1957
).
Sur la localisation des cellules germinales primordiales chez l’ embryon de Poulet et sur leur mode de migration vers les ébauches gonadiques
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
244
,
1541
3
.
Vintemberger
,
P.
&
Clavert
,
J.
(
1959
).
Sur le déterminisme de la symétrie bilatérale chez les Oiseaux. XI. Le moment de la détermination de l’ axe embryonnaire, d’ après les résultats de nos expériences de retournement de l’ œuf de Poule dans l’ utérus
.
C. r. Séanc. Soc. Biol
.
153
,
661
5
.
Wolff
,
ET
. (
1960
).
Sur une nouvelle modalité de la culture organotypique
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
250
,
3881
2
.
Wolff
,
ET.
&
Haffen
,
K.
(
1952
).
Sur une méthode de culture d’ organes embryonnaires in vitro
.
Tex. Rep. Biol. Med
.
10
,
463
72
.
Wolff
,
ET.
&
Lutz
,
H.
(
1947
).
Sur une méthode permettant d’ obtenir expérimentalement le dédoublement des embryons d’ Oiseaux
.
C. r. Séanc. Soc. Biol
.
141
,
901
2
.
Wolff
,
ET.
&
Simon
,
D.
(
1957
).
L’ explantation et la parabiose in vitro de blastodermes incubés d’ embryons de Poulet. L’ organisation de la circulation extra-embryonnaire
.
C. r. hebd. Séanc. Acad. Sci., Paris
241
,
1994
6
.
PLANCHE 1

(Détails de la reconstitution B, Schéma I)

Côté témoin

Fig. 1. CGP située dans l’ endoblaste vitellin, son lieu d’ origine, x 800.

Fig. 2. CGP libérée de la couche vitelline profonde et flottant dans un capillaire sanguin en formation, x 800.

Fig. 3. CGP adhérant à l’ endothélium d’ un îlot sanguin. Remarquer l’ aspect amiboïde du cytoplasme, x 800.

Interposition de la membrane coquillière

Fig. 4-6. Les CGP sortent du feuillet endophyllien profond et viennent se coller contre l’ obstacle, ou flottent librement dans les lacunes ménagées par la membrane coquillière et les replis de l’ endophylle. Quelques CGP se libèrent plus tardivement de l’ endoblaste vitellin (fig. 4). x 800.

(MC= membrane coquillière; E= endothélium; CS=capillaires sanguins; £W=endo-phylle, endoblaste vitellin.)

PLANCHE 1

(Détails de la reconstitution B, Schéma I)

Côté témoin

Fig. 1. CGP située dans l’ endoblaste vitellin, son lieu d’ origine, x 800.

Fig. 2. CGP libérée de la couche vitelline profonde et flottant dans un capillaire sanguin en formation, x 800.

Fig. 3. CGP adhérant à l’ endothélium d’ un îlot sanguin. Remarquer l’ aspect amiboïde du cytoplasme, x 800.

Interposition de la membrane coquillière

Fig. 4-6. Les CGP sortent du feuillet endophyllien profond et viennent se coller contre l’ obstacle, ou flottent librement dans les lacunes ménagées par la membrane coquillière et les replis de l’ endophylle. Quelques CGP se libèrent plus tardivement de l’ endoblaste vitellin (fig. 4). x 800.

(MC= membrane coquillière; E= endothélium; CS=capillaires sanguins; £W=endo-phylle, endoblaste vitellin.)

PLANCHE 2

Fig. 7-9. Trois étapes de l’ entrée des CGP de l’ endophylle dans le réseau vasculaire postérieur, en culture in vitro. Les CGP franchissent l’ endothélium par diapédèse (fig. 8) et pénètrent dans les capillaires sanguins (fig. 9). x 800.

Fig. 10. Fragment d’ endoblaste vitellin fertile cultivé in vitro dans un repli de membrane vitelline pendant 24 h. Une CGP est sortie et flotte librement dans une lacune limitée par les replis de l’ endophylle. D’ autres cellules germinales sont visibles dans le feuillet endoblastique.x 320.

Fig. 11. Colonisation d’ un espace libre du foie de 9 jours par un groupe de CGP. Coloration par le Noir Soudan, x 300.

Fig. 12. Même chose que précédemment. Gonocyte installé dans une lacune ménagée par les tissus du foie. Remarquer les inclusions soudanophiles intracytoplasmiques de la cellule germinale, x 800.

Fig. 13. CGP installée dans l’ épithélium ectoblastique d’ un embryon ayant atteint le stade des premiers somites. Le mésoblaste extra-embryonnaire n’ a pas encore envahi cette région (zone du proamnios). x 800.

PLANCHE 2

Fig. 7-9. Trois étapes de l’ entrée des CGP de l’ endophylle dans le réseau vasculaire postérieur, en culture in vitro. Les CGP franchissent l’ endothélium par diapédèse (fig. 8) et pénètrent dans les capillaires sanguins (fig. 9). x 800.

Fig. 10. Fragment d’ endoblaste vitellin fertile cultivé in vitro dans un repli de membrane vitelline pendant 24 h. Une CGP est sortie et flotte librement dans une lacune limitée par les replis de l’ endophylle. D’ autres cellules germinales sont visibles dans le feuillet endoblastique.x 320.

Fig. 11. Colonisation d’ un espace libre du foie de 9 jours par un groupe de CGP. Coloration par le Noir Soudan, x 300.

Fig. 12. Même chose que précédemment. Gonocyte installé dans une lacune ménagée par les tissus du foie. Remarquer les inclusions soudanophiles intracytoplasmiques de la cellule germinale, x 800.

Fig. 13. CGP installée dans l’ épithélium ectoblastique d’ un embryon ayant atteint le stade des premiers somites. Le mésoblaste extra-embryonnaire n’ a pas encore envahi cette région (zone du proamnios). x 800.

PLANCHE 3

Fig. 14. Pénétration dans le mésonéphros de 9 jours. Les CGP essaiment hors de l’ endoblaste vitellin et envahissent les espaces intertubulaires, mais ne pénètrent pas dans l’ épithélium des tubules mésonéphrétiques, x 200.

Fig. 15. Gonocytes envahissant les tissus sous-dermiques et dermiques de la peau de 9 jours. Remarquer comment la structure du tissu colonisé impose des déformations aux CGP et comment elle guide leur migration: les CGP, alignées, progressent en suivant les lignes de moindre résistance, x 320.

Fig. 16. Cellule germinale ayant quitté l’ endoblaste vitellin et ayant effectué une longue migration dans les tissus de la peau de 9 jours. Remarquer l’ abondance des gouttelettes lipidiques révélées par le Noir Soudan, x 800.

Fig. 17. CGP installée dans le mésenchyme pulmonaire de 9 jours. Grande richesse en constituants cytoplasmiques soudanophiles (lipides figurés), x 800.

Fig. 18-20. La peau de 9 jours (fig. .18, x 800) et le poumon de 9 jours (fig. 19, x 320, et fig. 20, x 800) ne sont pas colonisés par les gonocytes primaires de la gonade morphologiquement indifférenciée. Par contre, ces gonocytes primaires sortent de la gonade et pénétrent dans un jeune épithélium germinatif attractif.

(CS = capillaires sanguins; E= endothélium; £W=endophylle; F=foie; £c/ = ectoblaste; Més=mésonéphros; Pe = peau; Po = poumon; Go = gonade embryonnaire morphologiquement indifférenciée).

PLANCHE 3

Fig. 14. Pénétration dans le mésonéphros de 9 jours. Les CGP essaiment hors de l’ endoblaste vitellin et envahissent les espaces intertubulaires, mais ne pénètrent pas dans l’ épithélium des tubules mésonéphrétiques, x 200.

Fig. 15. Gonocytes envahissant les tissus sous-dermiques et dermiques de la peau de 9 jours. Remarquer comment la structure du tissu colonisé impose des déformations aux CGP et comment elle guide leur migration: les CGP, alignées, progressent en suivant les lignes de moindre résistance, x 320.

Fig. 16. Cellule germinale ayant quitté l’ endoblaste vitellin et ayant effectué une longue migration dans les tissus de la peau de 9 jours. Remarquer l’ abondance des gouttelettes lipidiques révélées par le Noir Soudan, x 800.

Fig. 17. CGP installée dans le mésenchyme pulmonaire de 9 jours. Grande richesse en constituants cytoplasmiques soudanophiles (lipides figurés), x 800.

Fig. 18-20. La peau de 9 jours (fig. .18, x 800) et le poumon de 9 jours (fig. 19, x 320, et fig. 20, x 800) ne sont pas colonisés par les gonocytes primaires de la gonade morphologiquement indifférenciée. Par contre, ces gonocytes primaires sortent de la gonade et pénétrent dans un jeune épithélium germinatif attractif.

(CS = capillaires sanguins; E= endothélium; £W=endophylle; F=foie; £c/ = ectoblaste; Més=mésonéphros; Pe = peau; Po = poumon; Go = gonade embryonnaire morphologiquement indifférenciée).